Vsebina
Mikrobiologi z mikroskopom preučujejo značilnosti mikroorganizmov, kot so alge, bakterije, praživali, glive in virusi. Čeprav je nekatere organizme, kot so protozoje in celice kvasovk, zlahka videti skozi stekelce, je treba bakterijske celice obarvati. Znanstveniki so za izboljšanje vizualizacije bakterijskih celic in celičnih struktur razvili več metod, kot so tehnika obarvanja po Gramu, barvanje, odporno proti kislinam, in fluorescentno obarvanje. S takšnimi metodami obarvanja je mogoče prepoznati strukturne značilnosti, ki pomagajo razvrstiti bakterije.
Boljši ogled
Bakterijski organizmi so tako majhni, da jih je večina vidna le pod mikroskopom s 1000-kratno povečavo. Vendar preprosto povečanje velikosti ne zagotavlja zadostne jasnosti, zato je treba bakterije pred opazovanjem obarvati, da se zagotovi jasnost, potrebna za vizualizacijo.
Identifikacija in razvrstitev
Obarvanje bakterij za razlikovanje med vrstami bakterij je znano kot diferencialno obarvanje. Barvanje po Gramu je diferencialno barvanje, ki razlikuje bakterije glede na vsebnost celične stene. Pri tej metodi bakterijske celice reagirajo s kristalno vijoličnim barvilom, da postanejo vijolične. Z dodatkom belilnega sredstva nekatere bakterijske celice izgubijo barvo, druge pa ne. Z dodatkom safraninskega barvila postanejo obarvane celice rdeče, medtem ko bakterijske celice, ki ne izgubijo barve, ostanejo vijolične. Celice, ki postanejo rdeče, se imenujejo gram negativni organizmi, celice, ki ne pordečijo, pa se uvrščajo med gram pozitivne organizme. Tehnika obarvanja po Gramu ponuja hitro metodo za začetno identifikacijo bakterij, ki sodelujejo pri okužbah. Prav tako postopek obarvanja, odporen na kisline, pomaga natančno prepoznati organizme iz razreda bakterij, imenovanih mikobakterije, kot je Mycobacterium tuberculosis.
Zaznavanje izvedljivosti
V vzorcih bakterijskih kultur je pogosto pomembno zaznati prisotnost živih bakterijskih celic. Metode, kot je fluorescenčno obarvanje, pomagajo ugotoviti, ali so celice za gojenje sposobne preživeti ali ne. Žive bakterije lahko pretvorijo tetrazolijev 5-ciano-2,3-ditolilklorid (CTC) v barvilo, ki kaže rdečo fluorescenco. Ko torej kulture, obarvane s CTC, oddajajo te fluorescence, to kaže na prisotnost sposobnih bakterij. Propidijev jodid je madež, ki deluje samo na nežive celice, ki imajo poškodovane membrane in je zato koristen pri prepoznavanju odmrlih bakterijskih celic.
Identifikacija celičnih struktur
Obarvanje zagotavlja metodo jasne vizualizacije različnih celičnih struktur. Na primer, metoda obarvanja po Feulgenu omogoča identifikacijo jedra v bakterijskih celicah, medtem ko je obarvanje po Albertu koristno pri vizualizaciji metakromatskih zrnc. Tudi tehnika impregnacije s srebrom omogoča identifikacijo spirohet. Bičevje je enostavno opaziti, če so obarvani z Ryujevo barvo. Malahitsko zeleno obarvanje pomaga prepoznati bakterijske spore.
