Vsebina

• Navodila

Ko se udeležite višje stopnje mikrobiologije, lahko vaš učitelj zahteva, da dokončate projekt, v katerem morate identificirati neznano bakterijo z vrsto testov. Za pravilno identifikacijo te bakterije je potrebno imeti vso ustrezno laboratorijsko opremo in poznati različne laboratorijske postopke. Prav tako je koristno imeti diagram poteka bakterij in njihove laboratorijske teste, da boste lahko prepoznali vaše bakterije.

Navodila

Kulturne plošče omogočajo, da se bakterije izolirajo in zlahka prepoznajo njihove značilnosti (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Pred začetkom poskusa pripravite vse teste. To vključuje pripravo agarnih plošč in cevi ter pripravo potrebnih indikatorjev, kot je Kovacov reagent. Vse epruvete in plošče ustrezno označite, da se ne mešajo, kar vodi do napačnih rezultatov.

2. Sijte svoje bakterije. To bo določilo obliko in barvo vaše bakterije, kot so gram pozitivni (vijolični), gram negativni (rdeči ali rožnati), kokosi (krožni), spirohete (spiralno) ali palice. Za setev bakterije boste potrebovali čisto rezilo, vodo, kristalizirano vijolico, jod, belilo, safranin, vpojni papir, svetlobni mikroskop in nekatere papirnate brisače. Po spenjanju z zanko uporabite kapljico vode na rezilo. Znova spnite zanko in nato v kapljico vode postavite majhno količino vaših neznanih bakterij. Nož čez plamen nekajkrat prepustite, da se posuši in v celoti pritrdite bakterije na rezilo. Pokrijte ga s kristalizirano vijolico, pustite jo minuto in jo nežno operite. Nato prekrijte rezilo z jodom. Pustite delovati 30 sekund in nato operite. Postavite kos vpojnega papirja na rezilo, da odstranite odvečno vodo. Nato vlijte belilo na rezilo. Po petih sekundah sperite, da odstranite belilo. Nazadnje pokrijte rezilo s safraninom. Po 40 sekundah operite rezilo in ga nežno posušite s papirnato brisačo. Postavite kapljico olja na mesto bakterij na stekelcu in poglejte pod mikroskopom. Upoštevajte obliko in barvo vidnih bakterij.

   
   

3. Testirajte oksidazo v vaših bakterijah. Za to potrebujete papirni filter, oksidazni reagent, E. coli, Pseudomonas in njegove neznane bakterije. V tem preskusu so kontrolne skupine E. coli in Pseudomonas. Vaša bakterija mora biti starejša od 24 ur za ta test. Potegnite ročaj in vstavite majhno količino vsake bakterije na filter papirja. S kapalko postavite eno kapljico reagentne oksidaze v vsako bakterijo. Po 10 sekundah si zapomnite barvo vsake bakterije. E. coli bo dala pozitiven rezultat, Pseudomonas pa bo dal negativen rezultat. Bakterije, pozitivne na encim citokrom oksidaze, bodo postale vijolične, negativne bakterije pa ne bodo spremenile barve.

4. Preskus na vodikov sulfid (SIM). Flick ročaj in ga uporabite za pobiranje nekaj bakterij iz plošče. Cevko SIM inokulirajte z bakterijami in jo pokrijte. To epruveto pustimo v pečici 18 do 24 ur pri 37 ° C. Ugotovite, ali je vaša bakterija mobilna (ima flagellum). Če je rast in oblačnost daleč od mesta, kjer ste bakterizirali bakterijo, je mobilna. Nato v epruveto položimo dve kapljici reagenta Kovac. Če se barva spremeni v rdečo ali rožnato, je njena bakterija pozitivna na ta test in vsebuje triptofan, zato je proizvajalec indola. Če cevka postane črna, bakterije proizvajajo vodikov sulfid.

   
   

5. Izvedite test simmon citrata. Inokulirajte bakterijo v dveh epruvetah s Simmonovim agarjem. Pustite jih v peči 18 do 24 ur pri 37 ° C. Agar je prvotno zelen, če pa bakterije uporabljajo citrat kot vir ogljika, se barva spremeni iz zelene v modro. Modra je pozitivni rezultat. Če cevke ostanejo zelene, so njihove bakterije negativne za uporabo citrata kot enega samega vira ogljika.

6. Izvedite test metil metil rdeče (MRVP). Za ta test potrebujete dve epruveti, ki vsebujejo raztopino peptona, puferjev in dekstroze (ali glukoze). Vsako epruveto inokulirajte z neznano bakterijo in se vrnite na peč 18 do 24 ur pri 37 ° C. Ko ste pripravljeni, dodajte v epruveto tri kapljice metil rdečega. To bo vaša MR cev. Če se cev spremeni iz rumene v rdečo, je njena bakterija pozitivna in pri fermentaciji uporablja mešano kislinsko pot (proizvajajo se mlečna, ocetna in mravljinčna kislina). V drugo cevko dodajte tri kapljice reagenta VP. Če postane cevka rdeča, bakterija pozitivno vpliva na tvorbo diacetila, produkta fermentacije. Če cevka postane rjava, je bakterija negativna.

7. Poiščite svoje bakterije tako, da zabeležite pozitivne in negativne rezultate v diagramu poteka.