Vsebina
Visoko zmogljiva tekočinska kromatografija (HPLC) je orodje za ločevanje snovi od zmesi. Ločevanje in identifikacija nekaterih kemikalij se pojavlja predvsem v kromatografski koloni sistema. Za CLAE je na voljo veliko vrst stolpcev, vsak pa se uporablja za določeno vrsto analize. Stolpec C18 je najmočnejši nepolarni na splošno. Po neprekinjeni daljši uporabi se pretok topila skozi to zmanjša in čas analize se poveča. Drug vzrok za zmanjšanje časa analize je, da imamo vzorce, ki puščajo majhne količine kemikalij v materialu kolone, kar zmanjšuje sposobnost njihovega ločevanja. Obnovo njegove površine lahko izvedemo z obdelavo materiala z vrsto posebnih topil, da ga očistimo od preostalih vzorcev in oživimo podporni material.
Korak 1
Odstranite stolpec C18 iz smeri toka in ga postavite v nasprotno smer. Vrnitev topila skozi to bo ublažila učinek kopičenja, ki se pojavi sčasoma. Paziti je treba, da na koncu kolone ne ostane preveč materiala. Nekatere tovarne uporabljajo večjo mrežo na vrhu, tako da je, ko tok spremeni smer, mreža v spodnjem položaju. Ta metoda obnove se imenuje preusmeritev pretoka. Da preprečite, da bi nabiranje teklo v sistemski detektor in morda povzročilo oviro, pustite, da deluje brez priključenega detektorja, in usmerite tok iz kolone na odstranjevanje.
2. korak
Postavite cev za pretok topila v vrsto topil, da eluirate katero koli spojino, zadržano v koloni, v nasprotni smeri. Ta topila se razlikujejo po svojih hidrofilnih lastnostih. Če jih spreminjate, boste eluirali spojine enako raznolike hidrofilne narave. Zaporedoma uporabite 50 ml vsakega od naslednjih topil: voda (če uporabljate pufer), metanol, izopropanol, diklorometan, heksan, diklorometan in izopropanol.
3. korak
Stolpec zamenjajte v pravo smer in skozi to teče topilo. Pred nadaljevanjem ga umijte z najmanj 75 ml. Preizkusite ga z vzorcem, ki ste ga uporabili, ko je bil nov, in preverite rezultate. Bodite pozorni, ko dosežete največje zadrževalne točke in skupni čas analize. Stopnja, do katere se ti atributi ujemajo z začetnim preskusom, ko je bil še nov, bo pokazala stopnjo obnovitve stolpca. Če rezultati niso zadovoljivi, stolpec zamenjajte z novim in starega zavrzite.
