Vsebina

• Razbijanje celičnih sten
• Odstranjevanje lipidov
• Odstranjevanje beljakovin
• Obarjanje DNA
• Čiščenje DNA

Hladni alkohol se uporablja za ločevanje DNK od raztopin na vodni osnovi, kar omogoča, da se očisti za nadaljnje genetsko testiranje. Dodajanje alkohola raztopini, ki vsebuje DNK, je preprost način, da postane čist pri nižjih temperaturah in upočasni encime, ki ga razgradijo, kar daje boljše rezultate ekstrakcije.

DNA oborimo v prisotnosti alkohola (DNA slika Allyson Ricketts iz Fotolia.com)

Razbijanje celičnih sten

Postopki ekstrakcije za pridobitev čiste DNK se morajo znebiti vseh molekularnih in kemičnih sestavin tkiva, iz katerega se ekstrahira DNA. Prvi koraki vključujejo uničenje celičnih sten. To lahko naredimo z različnimi kemičnimi snovmi, ki so jedke do celičnih membran, vendar ne poškodujejo DNK. Celice lahko tudi sonificiramo, homogeniziramo ali zmeljemo, da uničimo membrane.

Celične stene je treba uničiti, da dosežejo DNK v njih (celice 72 slike, ki jih chrisharvey iz Fotolia.com)

Odstranjevanje lipidov

Ko so celične stene uničene, dodamo detergent, da se znebite maščob in olj, ki sestavljajo celične membrane. Detergenti povzročajo raztapljanje olj in maščob v raztopini.

Odstranjevanje beljakovin

Proteine ​​in encime lahko raztopimo tako, da raztopini dodamo proteazo. Proteaze razgrajujejo beljakovine v majhne peptide in aminokisline.

Obarjanje DNA

Dodajanje ledeno mrzlega alkohola raztopini se obori in agregira DNA. Genetski material lahko zberemo s centrifugiranjem vzorca in dekantiranjem tekoče plasti. Obstajati mora kot majhna usedlina na dnu epruvete za centrifugiranje.

Čiščenje DNA

DNA lahko speremo z ponovno suspendiranjem v hladni alkoholni raztopini in večkrat ponovno centrifugiramo, da dobimo zelo čist vzorec. Uporabljeni tipični alkoholi vključujejo etanol in izopropanol. Ta postopek pri strogih testih pušča zelo čist vzorec.