Vsebina

• Navodila
• Obnavljanje stolpca
• Kako
• Obvestilo
• Kaj potrebujete

Tekoča kromatografija z visoko zmogljivostjo (HPLC) je običajna metoda laboratorijske analize, pri kateri se vzorec med prehodom skozi kolono loči na svoje kemijske komponente. Ta kolona je napolnjena s poroznim materialom, običajno silikagelom. Standardni stolpec reverzne faze, kot je C8, se lahko včasih zamaši ali onesnaži. Te stolpce je mogoče pridobiti z zelo preprostimi tehnikami.

Navodila

Desno topilo lahko pridobi umazano kolono (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Obnavljanje stolpca

1. Izklopite kolono in obrnite njen položaj, tako da mobilna faza zdaj vstopa skozi to, kar je običajno izhodna kolona. Na drugi konec stebra (ki je bil prvotni vnos) pritrdite vtičnico in pustite, da se izprazni.

2. Črpalite vrsto topil po padajoči polarnosti. Priporočena osnovna serija je, da se začne z metanolom, nato preklopi na acetonitril, nato acetonitril / izopropanol (75:25), izopropanol, metilen klorid in heksan. Če je bila mobilna faza, ki je bila v koloni, absorbentna, se priporoča prehod z vodo pred tem v metanolu. Zadostuje pretok od enega do dveh mililitrov na minuto in črpa se približno deset volumskih stolpcev vsakega topila. Volumski stolpec je notranji prostor kolone in se izračuna z (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), kjer je DI notranji premer kolone in L dolžina.

   
   

3. V kolono prečrpajte še deset volumnov izopropanola, da ga pripravite za uporabo z originalno mobilno fazo. Če je bila prvotna mobilna faza oblazinjena, potem izčrpajte vodo skozi kolono po izopropanolu, preden se vrnete v prvotno mobilno fazo.

4. Odklopite kolono, ga obrnite in ponovno vklopite, tako da je v prvotnem položaju (tako, da premična faza vstopi na desno stran stebra). Znova priključite izhod zvočnika na detektor.

Kako

• Če ta postopek ne opravi temeljitega čiščenja kolone, lahko uporabimo 50:50 mešanico dimetil sulfoksida (DMSO) in dimetil formamida (DMF). Ostanki beljakovin in kovinskih ionov lahko zahtevajo druge vrste topil, kot so ionski varčni reagenti ali raztopina etilen diamin tetraocetne kisline (EDTA).

Obvestilo

• Pri nekaterih napravah bo imela hrbtenica grobo kovinsko sito kot dovod. V tem primeru bo obračanje kolone omogočilo, da stacionarna faza zapusti stolpec, in to ni priporočljivo. Če niste prepričani, se posvetujte s svojim prodajalcem.
• Topilo, uporabljeno v tem postopku, je potencialno strupeno pri zaužitju in vdihavanju. Pri rokovanju uporabite običajne laboratorijske previdnostne ukrepe.

Kaj potrebujete

• Naprava HPLC
• Voda
• Metanol
• Acetonitril
• Izopropanol
• Metilen klorid
• Heksan